혈중아포지단백질(APOLIPOPROTEIN)의농도측정방법

Title
혈중아포지단백질(APOLIPOPROTEIN)의농도측정방법
Issue Date
1993-05-31
Publisher
한국과학기술연구원
Abstract
지단백질 복합물, 아포지단백질 복합물 또는 아포지 단백질 분자의 일부분을 피복한 고체면을 이용하여, 순환 기계 질환의 지표가 되는 아포지 단백질의 혈중 농도를 측정하는 방법 및 이를 이용한 순환 기계 질환의 진단 키트 시스템을 제공한다.96-공 미적 적정판에 5mg 내지 10mg의 지단백질-복합물 0.5mg의 유전자 재조합 기술에 의하여 생산한 해당 아포지 단백질 분자의 에피토프 부분 단백질을 100mg 부피로 넣어 섭씨 4도에서 하룻밤 흡착시킨 후, 0.05% 우형 혈청 알부민과 0.05% 트윈 20이 함유된 PBS 완충액으로 흡착되지 않고, 남은 지단백즐을 세척한다. 비특이 결합을 막기 위하여, 3% 우형 혈청 알부민과 5% 탈지 분유가 포함된 PBS 완추액을 넣어 반응시키고, PBS 완충액으로 세척한 후, 여기에 200배 희석시킨 인간 혈액 시료와 항혈청 또는 단일클론성 항체를 50mg씩 넣어 섭씨 4도에서 하룻밤 동안 반응시킨다. 이어 과산화효소나 알칼리성 인산 분해 효소를 결합시킨 2차 항체를 첨가하거나, 또는 1차 항체로서 이들 효소와 결합시킨 것을 사용하면, 2차 항체를 사용하지 않고, 효소의 기질을 넣어 발색시켜 ELISA 판독기로 450nm에서 흡광도를 측정한다. 아포지 단백질 B에 대한 항체는 1.75×10(-3)배로 희석하여 사용하고, 아포지 단백질 A-I에 대한 항체는 2.5×10(3)배로 희석하여 사용한다.
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